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維生素C乙基醚價格

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vc和vc乙基醚用哪種陰離子交換樹脂

發布日期:2018-10-14 作者: 點擊:

離交換層析(Ion Exchange Chromatography簡稱IEC)離交換劑固定相依據流相組離與交換劑平衡離進行逆交換結合力差別進行離種層析1848Thompson等研究土壤堿性物質交換程發現離交換現象本世紀40代現具穩定交換特性聚苯乙烯離交換樹脂50代離交換層析進入物化領域應用于氨基酸析目前離交換層析仍物化領域用種層析廣泛應用于各種化物質氨基酸、蛋白、糖類、核苷酸等離純化用離交換劑:離交換纖維素、離交換葡聚糖離交換樹脂離交換層析基質由帶電荷樹脂或纖維素組帶電荷稱陰離交換樹脂;帶負電荷稱陽離樹脂離交換層析同用于蛋白質離純化由于蛋白質等電點蛋白質處于同pH條件其帶電狀況同陰離交換基質結合帶負電荷蛋白質所類蛋白質留柱通提高洗脫液鹽濃度等措施吸附柱蛋白質洗脫結合較弱蛋白質首先洗脫反陽離交換基質結合帶電荷蛋白質結合蛋白通逐步增加洗脫液鹽濃度或提高洗脫液pH值洗脫

⒈離交換劑預處理裝柱于離交換纖維素要用流水洗少量碎易沉淀顆粒保證較均勻度于已溶脹產品則必經步驟溶脹交換劑使用前要用稀酸或稀堿處理使帶H+或OH-交換劑型陰離交換劑用堿-酸-堿處理使終轉-OH-型或鹽型交換劑;于陽離交換劑則用酸-堿-酸處理使終轉-H-型交換劑洗滌纖維素使用前必須平衡至所需pH離強度已平衡交換劑裝柱前要減壓除氣泡避免顆粒等交換劑自沉降層要適加壓裝柱同使柱床壓緊減少死體積利于辨率提高柱裝再用起始緩沖液淋洗直至達充平衡使用

⒉加與洗脫加:層析所用品應與起始緩沖液相同pH離強度所選定pH值應落交換劑與結合物相反電荷范圍同要注意離強度應低用透析、凝膠濾或稀釋達目品溶物應透析或凝膠濾前離除達滿意離效量要適要超柱負荷能力柱負荷能力用交換容量推算通量交換劑交換總量1%-5%洗脫:已結合品離交換前通改變溶液pH或改變離強度結合物洗脫同改變pH與離強度使復雜組份離完全往往需要逐步改變pH或離強度其簡單階段洗脫即同pH與離強度溶液加入使同逐步洗脫由于種洗脫pH與離強度變化使許洗脫體積相近同洗脫純度較差適宜精細離洗脫連續梯度洗脫洗脫裝置見圖16-6.兩容器放于同水平第容器盛定pH緩沖液第二容器含高鹽濃度或同pH緩沖液兩容器連通第容器與柱相連溶液由第容器流入柱第二容器溶液自補充經攪拌與第容器溶液相混合流入柱緩沖液洗脫能力即梯度變化第容器任何間濃度都用式進行計算:C=C2-(C2-C1)(1-V)A2/A1式A1、A2別代表兩容器截面積:C1、C2別表示容器溶液濃度;V流體積總體積比A1=A2線性梯度A1>A2凹形梯度A1>A2凸形梯度洗脫應滿足要求:①洗脫液體積應足夠般要幾十倍于床體積使離各峰致于太擁擠②梯度限要足夠高使緊密吸附物質能洗脫③梯度要升太快要恰使移區帶快柱末端達解吸狀態目物早解吸引起區帶擴散;目物晚解吸使峰形寬

⒊洗脫餾份析按定體積(5-10ml/管)收集洗脫液逐管進行測定層析圖譜依實驗目同采用適宜檢測(物性測定、免疫測定等)確定圖譜目物位置并收目物

⒋離交換劑再與保存離交換劑柱再離交換纖維素用2mol/:NaCl淋洗柱若強吸附物則用0.1mol/LNaOH洗柱;若脂溶性物質則用非離型污劑洗柱再用乙醇洗滌其順序:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水保存離交換劑要加防腐劑陰離交換劑宜用0.002%氯已定(洗必泰)陽離交換劑用乙基硫柳汞(0.005%)些產品建立用0.02%疊氮鈉

⒌離交換層析應用離交換層析技術已廣泛用于各科領域物化及臨床化檢驗主要用于離氨基酸、肽及蛋白質用于離核酸、核苷酸及其帶電荷物

概念

層析色層析簡稱利用各組物理性質同組混合物進行離及測定吸附層析、配層析兩種般用于機化合物、金屬離、氨基酸等析層析(chromatography)利用物質固定相與流相間同配比例達離目技術層析物蛋白質核酸等復雜機物混合物離析極高辨力

[編輯本段]語源

chrome意色彩graphy源自希臘文意寫色譜層析同義語都英語chromatography譯

層析(色譜) chromatograpby

微細散固體或附著于固體表面液體作固定相液體(與述液體相混合)或氣體作移相系統使試料混合物各邊保持向兩相布平衡狀態邊移利用各固定相親力同所引起移速度差彼離定性與定量析稱層析亦稱色譜根據移相種類同液體層析、氣體層析二種用作固定相矽膠、性炭、氧化鋁、離交換樹脂、離交換纖維等或硅藻土纖維素性載體附著適液體使用其物質作固定相微細粉末狀物質裝入細形圓筒進行層析稱柱層析(column chromatogra-phy)玻璃板涂層薄均物質作固定相稱薄層層析(thin-layer chromatography)者與用濾紙作固定相紙層析進行同析即固定相端點微量試料密閉容器使移相(液體)端滲入移接近另端通種展操作各呈斑點狀移各自位置再根據Rf值測定進行鑒定斑點易肉眼觀察利用適顯色劑或通紫外燈產熒光進行觀察采用第種移相展再用另移相進行展(展向應與原向垂直)使各離完全雙相層析(two-dimensional chromatography)離斑點位置固定相切取其含自試料物質提取進行定量析制備與定量柱層析則更適宜柱層析移相加入試料端展達另端繼續展使各移相起向柱外別溶廣泛使用所謂洗提層析(elution chromatography)層析根據固定相與溶質(試料)間親力差異吸附型、配型、離交換型(離交換層析)等三種類型并嚴格見其間類型外近應用親層析即與基質類似化合物(通共價鍵)結合固定相再利用其特異親性沉淀與其應特定酶或蛋白質

[編輯本段]類別

◆按層析機理劃:

吸附層析、配層析、離交換層析、凝膠濾層析、親層析等

吸附層析:利用吸附劑表面同組吸附性能差異達離鑒定目

配層析:利用同組流相固定相間配系數同使離

離交換層析:利用同組離交換劑親力同

凝膠層析:利用某些凝膠于同組阻滯作用同

◆按流相與固定相同劃:

氣相層析、液相層析兩類層析流相同劃同區流相固定相劃:氣固層析、氣液層析、液固層析液液層析等

◆按操作形式劃:

柱層析、紙層析、薄層層析、高效液相層析等

柱層析:固定相裝于柱內使品沿向移達離

紙層析:用濾紙做液體載體點用流相展達離鑒定目

薄層層析:適粒度吸附劑鋪薄層紙層析類似進行物質離鑒定

劃嚴格界限些名稱相互交叉親層析應屬于種特殊吸附層析紙層析種配層析柱層析做各種層析

[編輯本段]基本原理

層析須兩相系統間進行相固定相需支持物固體或液體另相流相液體或氣體流相流經固定相離物質兩相間配由平衡狀態失平衡恢復平衡即斷經歷吸附解吸程隨著流相斷向前流離物質間現向前移速率差異由始單區帶逐漸離許區帶程叫展層

系數K物質兩相濃度比K值則固定相吸附牢K值吸附差各物質間K值差別則易離同類型層析K值含義同視吸附平衡數配數或離交換數等

研究層析現象發展塔板理論與機化實驗餾原理些相似餾機溶劑餾柱內填充物形許熱交換層低沸點溶劑先餾達純化目層析用理論塔板數n衡量層析效能

tR物質層析柱保留間W洗脫物質峰形寬度n值愈表示層析柱效能愈高用理論塔板高度H表示則包含層析柱度

式L層析柱柱H值越則柱效越低

外影響層析離效渦流擴散、縱向擴散傳質阻抗等素選擇層析固定相支持物粒度、均勻度等物理性能流相層析系統溫度等都做層析關鍵

[編輯本段]幾種用層析

◆吸附層析

吸附劑吸附力強弱由能否效接受或供給電或提供接受潑氫決定吸附物化結構與吸附劑相似電特性吸附更牢固用吸附劑吸附力強弱順序:性炭、氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣、石膏、纖維素、淀粉糖等性炭吸附力強吸附劑使用前須先用加熱脫水等化數吸附劑遇水即鈍化吸附層析用于能溶于機溶劑機化合物離較少用于機化合物洗脫溶劑解析能力強弱順序:醋酸、水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醚、氯仿、苯、四氯化碳烷等能較離效用兩種或數種同強度溶劑按定比例混合合適洗脫能力溶劑系統獲佳離效

◆配層析

支持物形部互溶兩相系統般水相機溶劑相用支持物硅膠、纖維素淀粉等些親水物質能儲留相量水離物質兩相都能溶解配比率同展層形同速度向前移區帶

◆離交換層析

支持物工交聯帶能解離基團機高離交換樹脂、離交換纖維素、離交換凝膠等帶陽離基團磺酸基(-SO3H)、羧甲基(-CH2COOH)磷酸基等陽離交換劑帶陰離基團DEAE-(二乙基胺乙基)QAE-(四級胺乙基)等陰離交換劑離交換層析適用于能水解離化合物包括機物機物于蛋白質、核酸、氨基酸及核苷酸離析極辨力離交換基團水溶液解離能吸引水離物離各種物質離交換劑離濃度與周圍溶液離濃度保持平衡狀態各種離同交換數K值愈高吸附愈牢洗脫增加溶液離強度改變pH增加鹽濃度離取代解吸洗脫程按K值同同區帶

◆凝膠濾層析

支持物工合交聯高聚物水膨脹凝膠凝膠內內水層凝膠周圍水外水層控制交聯度形同孔徑網狀結構交聯度孔徑交聯度孔徑凝膠允許離物質于孔徑進入于孔徑排斥外水層先洗脫進入孔徑按量致離同區帶選擇同規格凝膠混合物按量差異同組種曾稱篩目前用凝膠商品:葡聚糖凝膠(sephadex)、聚丙烯酰胺凝膠(bio-gel)、瓊脂糖凝膠(sepharose)聚苯乙烯凝膠(styragel)等

◆親層析

專相互作用物質其聯結支持物用于純化相另物質見親:酶抑制劑抗原抗體激素受體等支持物瓊脂糖或纖維素等

◆氣相層析

屬于配層析或吸附層析僅適用于析離揮發性低揮發性物質固定相惰性支持物(磨細耐火磚)覆蓋層高沸點液體硅油、高沸點石蠟油脂、環氧類聚合物外涂層約支持物重量20%析操作溫度范圍般室溫200℃特殊層析柱能達500℃流相用氦、氬或氮展層氣體氣相層析離區帶十清晰由于揮發性物質兩相間能快達平衡所需析間縮短般數鐘至10余鐘檢測記錄系統繪各峰測定流氣體電阻變化結測定品量微克毫微克水平具快速、靈敏微量優點氣相層析能用于離制備品需增加流氣體通冷凍離物收裝置

◆紙層析

濾紙支持物配層析組濾紙纖維素親水物質能形水相展層溶劑兩相系統離物質兩相配保持平衡關系紙層析用于析簡單混合物做單向層析于復雜混合物做雙向層析1944A.J.P.馬丁第用紙層析析氨基酸離效創近代層析發展應用新局面70代紙層析已逐漸其辨力更高、速度更快更微量化新離交換層析、薄層層析、高效液相層析等所代替

◆薄層層析

玻璃片、金屬箔或塑料片鋪層約1~2毫米支持物纖維素、硅膠、離交換劑、氧化鋁或聚酰胺等根據需要做同類型層析聚酰胺薄膜種特異薄層尼龍溶解于濃甲酸涂滌綸片基甲酸揮發滌綸片基形層孔薄膜其辨力超用尼龍粉鋪薄層薄層層析較紙層析優越于辨高展層間短例用紙層析做氨基酸析往往需要兩間且層析條件要求嚴格易滿意離效用薄層層析做般約需半離效更薄層層析般用于定性析能用于定量析制備品

◆高效液相層析(名高壓液相色譜)

70代新發展層析其特點:用高壓輸液泵壓強高達5000psi(相于34標準氣壓)用直徑約3~10微米超細支持物裝填均勻銹鋼柱用支持物玻璃珠涂層1~2微米二氧化硅經硫酰氯反應Si-Cl進步連接疏水烷基Si-C18H37或陽離交換基團-Si(CH2)n-C6H4SO3H或陰離交換基團-Si(CH2)nNH2種支持物能承受高壓力化性能穩定用同類型支持物HPLC做吸附層析、離交換層析凝膠濾層析其析微量化達10-10克水平用于制備純化克品展層間短般需幾鐘10余鐘其析速度、精確度與氣相層析媲美HPLC適于析離揮發極性物質氣相層析適用于揮發性物質兩者互補充都目前理想層析HPLC配程序控制洗脫溶劑梯度混合儀數據處理積儀記錄儀等電系統

種先進析儀器物化、化、醫藥環境科研究發揮重要作用

◆反相層析

吸附層析高極性物質層析柱吸附較牢洗脫發拖尾現象保留間問題支持物涂層高碳原疏水性強烷烴類洗脫液用極性強溶劑甲醇水混合物則離品極性強物質吸附先洗較離效種層析與普通吸附層析相反故稱反相層析目前用HPLC做反相層析用ODS柱即支持物表面連接C18H37Si-基團

◆同系層析

核酸析品經核酸酶部裂解同度核苷酸片段用同位素標記DEAE纖維素薄層離用含未標記相同核苷酸片段作展層溶劑未標記核苷酸標記核苷酸推進使按量同標記核苷酸片段按由序排列達離目于種層析稱同系層析同系層析電泳相結合曾用于寡核苷酸順序析

紙層析層析種,要解紙層層析始.層析稱色層析或色譜(Chromatography)種基于離物質物理、化及物特性同使某種基質移速度同進行離析例:我利用物質溶解度、吸附能力、立體化特性及、帶電情況及離交換、親力及特異物反應等面差異使其流相與固定相間配系數(或稱配數)同達彼離目

層析特點離效率高能離各種性質極相類似物質且既用于少量物質析鑒定用于量物質離純化制備作種重要析離手段與廣泛應用于科研究與工業產現石油、化工、醫藥衛、物科、環境科、農業科等領域都發揮著十重要作用層析根據固定相基質形式類層析紙層析、薄層層析柱層析其紙層析指濾紙作基質層析


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